| Résumé | À l’heure actuelle, la production d’adénovirus s’effectue à une densité cellulaire faible, car l’infection à des densités cellulaires élevées résulte encore à une diminution de la productivité spécifique des cellules. Pour mieux comprendre la carence en nutriments et les métabolites inhibiteurs qui entraînent la diminution des rendements spécifiques à des densités cellulaires élevées, nous avons évalué la production d’adénovirus dans des cellules rénales embryonnaires humaines (Human embryonic kidney ou HEK) 293 cultivées dans les milieux NSFM 13 et CD 293. Dans le cas des cellules cultivées dans le milieu NSFM 13, la productivité spécifique des cellules a diminué, passant de 3400 à 150 particules virales/cellule (diminution de 96 %) alors que la densité cellulaire à l’infection avait été augmentée pour passer de 1 à 3 x 106 cellules/ml. En comparaison, les cellules cultivées dans les mêmes conditions, mais dans le milieu CD 293 n’ont montré qu’une diminution de 50 % de la productivité spécifique des cellules. Nous avons constaté que l’effet de l’osmolalité du milieu est déterminant pour la production virale. Par conséquent, les milieux ont été ajustés à une osmolalité optimale de 290 mOsm/kg pour faciliter la comparaison. Les acides aminés ne constituent pas des facteurs limitants déterminants. Nous avons ajouté des nutriments potentiellement limitants aux cultures infectées, comme des vitamines, des métabolites énergétiques, des bases et des nucléotides ou des métabolites inhibiteurs (lactate et ammoniac) pour étudier plus à fond leurs effets sur la production d’adénovirus. L’accumulation de lactate et d’ammonium dans une culture infectée à 3 x 106 cellules/ml a contribué à une diminution d’environ 20 % du rendement de la production d’adénovirus, tandis que la carence en nutriments a semblé être le principal responsable de la baisse de production virale dans le cas des cellules cultivées dans le milieu NSFM 13. Dans l’ensemble, les résultats indiquent que de multiples facteurs contribuent à limiter le rendement de la production spécifique dans les cas de densités cellulaires supérieures à 1 x 106 cellules/ml et mettent en évidence le besoin d’étudier plus à fond et de mettre au point des milieux pour améliorer la production de vecteurs adénoviraux. |
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