| Résumé | Contexte : Les virus adéno-associés recombinants ou rAAV (recombinant adeno-associated virus) sont les vecteurs les plus prometteurs en thérapie génique. Toutefois, la production de rAAV à grande échelle en vue d’un transfert de stratégies thérapeutiques faisant appel à ces virus recombinants vers le milieu clinique reste un défi. Le système de vecteurs d’expression de baculovirus ou BEVS (baculovirus expression vector system) a été mis au point pour produire des titres élevés de rAAV dans des cultures de cellules d’insecte en suspension dans un milieu sans sérum. Méthodes : La méthode typique de production de rAAV dans un BEVS se fonde sur une infection synchrone par trois baculovirus à une multiplicité d’infection ou MOI élevée (> 3 unités formant des plages [ufp]/cellule). Une autre méthode consiste à co-infecter à une MOI faible (0,1 ufp/cellule). Nous avons comparé ces deux stratégies (MOI élevée et faible) à une densité cellulaire de 1,0 × 106 cellules/ml dans des expériences menées sous agitation en flacon. Pour augmenter le titre de rAAV, nous avons évalué la combinaison d’une MOI faible avec une densité cellulaire initiale au moment de l’infection de 5,0 × 106 cellules/ml en mode cuvée alimentée (fed-batch). Par la suite, cette stratégie de production a été validée en la réalisant dans des bioréacteurs d’une capacité de trois litres. Résultats : Nous avons obtenu une augmentation de 210 % du titre de rAAV (4,7 × 1011 unités de transduction augmentée/l) en utilisant une MOI faible, un effet attribuable principalement à l’utilisation d’une densité cellulaire plus élevée. La culture en cuvée alimentée a entraîné une augmentation du rendement de rAAV par un facteur de sept. Le contrôle des conditions que permet l’utilisation d’un bioréacteur a contribué à augmenter davantage le rendement de rAAV, soit de 25 % (2,8 × 1014 génomes de vecteur/l), comparativement aux résultats obtenus par la méthode d’agitation en flacon. Conclusions : Ce procédé de production à haut rendement, qui fait appel à des MOI faibles et à une stratégie alimentaire, comble avec succès plusieurs lacunes liées à la production de rAAV chez les cellules d’insecte, et contribue à positionner le BEVS comme l’un des systèmes les plus efficaces pour la production à grande échelle de vecteurs rAAV. |
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