| Résumé | Nous avons développé un nouveau système d'expression génique inductible pour Escherichia coli basé sur les éléments régulateurs des opérons cym et cmt de Pseudomonas putida F1 afin de contrôler l'expression d’un gène d’intérêt à l’étape de la transcription en utilisant du p-isopropylbenzoate (cumate) comme inducteur. Ce nouveau système d'expression, appelé commutateur génétique au cumate, est constitué d’un vecteur d'expression spécifique pNEW, contenant un promoteur partiel du phage T5 couplé à un opérateur synthétique de Pseudomonas et le gène codant le répresseur CymR conçu pour s’exprimer de manière constitutive dans la bactérie hôte. L’induction de la transcription du gène se fait par l’ajout du cumate, non toxique pour les cellules, hydrosoluble et peu coûteux. Afin de caractériser les potentialités de ce système d’expression, nous avons fait appel à la cytométrie de flux et à la culture en alimentation programmée. Nous montrons que l’induction du système par le cumate assure : i) une production accrue de protéines recombinantes, surpassant celle des systèmes induits par l'isopropyl P-D-thiogalactoside (IPTG), ii) une régulation de l'expression étroitement contrôlée, iii) une induction globale et homogène de la population exprimant la protéine d’intérêt qui contraste avec l'expression bimodale de la population induite par l’IPTG, iv) une modulation du niveau d'expression en fonction de la concentration en cumate, et v) le maintien de l’induction et de l’homogénéité de la population jusqu’à 8 h après l’ajout du cumate, permettant d’atteindre des rendements élevés en protéine d’intérêt. Enfin, ce système inductible par le cumate peut s’utiliser dans de nombreuses souches d’E. coli. |
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