| Résumé | Nous avons appliqué la méthodologie où l'activité de la ribonucléase H (RNase H) est dirigée par un DNA oligomère pour cliver spécifiquement le RNA du virus de la mosaïque du tabac (TMV). Utilisant un DNA oligomère synthétique P(dT8)dCdC, complémentaire d'une région allant du nucléotide 5545 au nucléotide 5554 à l'extrémité 3′ du RNA du TMV, nous avons clivé le RNA au site des polynucléotides complémentaires du DNA oligomère. Nous avons optimisé des facteurs tels que la structure secondaire du RNA, les concentrations du DNA oligomère, la RNase H et les ions magnésium dans le milieu de réaction et le temps d'incubation pour le clivage par la RNase H du complexe RNA du TMV et DNA oligomère. La dénaturation du RNA du TMV avec le dimethyl sulfoxyde 50% à 50 °C est essentielle au site de clivage spécifique. |
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